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Western Blot蛋白印跡實驗整體解決方案
時間:2021-02-20 15:21:53點擊量:4208次
為什么要做Western Blot?


蛋白印跡實驗(Western Blot)概念
印跡法(blotting)是指將樣品轉(zhuǎn)移到固相載體上,而后利用相應(yīng)的探測反應(yīng)來檢測樣品的一種方法。

1975年,Southern建立了將DNA轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(NC膜)上,并利用DNA- RNA雜交檢測特定的DNA片段的方法,稱為Southern印跡法。

而后人們用類似的方法,對RNA和蛋白質(zhì)進(jìn)行印跡分析,對RNA的印跡分析稱為Northern印跡法,對單向電泳后的蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱為Western印跡法,對雙向電泳后蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱為Eastern印跡法。



實驗原理

利用SDS-PAGE對蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行分離,然后轉(zhuǎn)移到固相載體(例如PVDF膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。利用蛋白溶液(如5%的BSA或脫脂奶粉溶液)封閉PVDF上剩余的疏水性結(jié)合位點,用所要研究的蛋白質(zhì)的抗體孵育結(jié)合目的蛋白,再用適當(dāng)標(biāo)記的二抗孵育結(jié)合一抗,輔以適當(dāng)?shù)牡孜锶芤禾幚鞵VDF膜,就會產(chǎn)生可見的區(qū)帶。

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Western-blot流程


樣本準(zhǔn)備→蛋白定量→電泳分離→轉(zhuǎn)膜→封閉→抗體孵育→檢測


1.制膠

常規(guī)制膠步驟耗時、耗力、繁瑣、費用高、容易漏膠、存在安全隱患等


PAG-100Auto 全自動蛋白凝膠預(yù)制系統(tǒng)

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制膠數(shù)目:5塊/10塊,每次最多可同時配制10塊蛋白凝膠

凝膠尺寸:1.0mm Mini-gel(88×68×1mm)

分離范圍:10-200kD

觸摸屏尺寸:5英寸電容觸摸屏,分辨率:800×480

進(jìn)樣器:雙進(jìn)樣器,加樣精度>95%

混勻器:雙磁力攪拌器,混合更均勻

設(shè)備清洗:全自動液路清洗系統(tǒng),試劑避免堵塞管路


PAG-100Auto 全自動蛋白凝膠預(yù)制系統(tǒng)

灌制分離膠 → 灌制濃縮膠 →插入梳子

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PAG-100Auto優(yōu)勢


節(jié)約時間試劑更少,配比簡單,分離膠和濃縮膠可同時配制。最快只需 5 分鐘完成制膠,15 分鐘即可上樣電泳,而電泳時間也僅需30-40 分鐘。

更好的重復(fù)性PAG-100Auto 配備兩個磁力攪拌器和兩路自動進(jìn)樣器,分別進(jìn)行分離膠和濃縮膠的灌入,加樣精度和重復(fù)性高,避免手動加樣誤差。

更好的兼容性獨有的凝膠緩沖體系使凝膠具有更好的交聯(lián)率和更均勻的孔徑,可完美分離10-200 kDa 蛋白,無需根據(jù)分子量大小計算配比,一次配制,基本可滿足整個實驗室的使用。

高通量

一次可配制 5 塊或 10 塊凝膠,根據(jù)需求選擇不同包裝的試劑,全部加入即可。多余的凝膠可 4℃ 存放 30 天,隨時取用。

更安全

試劑采用低丙烯酰胺系統(tǒng),配合獨有的 APS 引發(fā)體系,不但能保證快速有效的成膠,同時極大的預(yù)防了有害成份對實驗者健康的損害。

性價比更高

相比于預(yù)制膠的昂貴,手工制膠的繁瑣與耗時;PAG-100Auto 搭配PAG-100Kit制膠試劑盒,批量化制膠(可作為預(yù)制膠長時間保存),速度更快,操作更便捷,更具性價比。


2.發(fā)光之前的準(zhǔn)備

WB-600Auto全自動蛋白印跡處理系統(tǒng)

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WB-600Auto 全自動蛋白印跡處理系統(tǒng),通過儀器代替繁瑣、機(jī)械、重復(fù)、枯燥的人工實驗。高效、快速、自動化地完成 WB 實驗中對蛋白膜的封閉、洗膜、孵育等過程。您只需將轉(zhuǎn)印蛋白后的膜放到系統(tǒng)中,準(zhǔn)備相應(yīng)的試劑,并設(shè)定程序,剩下的工作將由WB-600Auto 自動完成。多達(dá)30 個可獨立運(yùn)行的液體泵,可同時進(jìn)行最多 6 塊膜的處理,每個通道可放置不同規(guī)格的樣品槽位,且可獨立設(shè)置程序運(yùn)行,互不干擾,真正實現(xiàn)高通量。

節(jié)約時間

拋開繁瑣機(jī)械的封閉洗膜孵育過程,原本需要 4個小時 的實驗,現(xiàn)在只需5分鐘 準(zhǔn)備試劑并設(shè)置程序,剩下所有的工作將由儀器自動完成。

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節(jié)約成本

完全兼容常規(guī)試劑,無專用試劑??稍O(shè)置一抗,甚至封閉液等昂貴試劑的自動回收,且試劑存儲位置可實現(xiàn)冷藏,實現(xiàn)重復(fù)利用,節(jié)約試劑成本。


重復(fù)性更好

標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程,可大大減少人工操作(如:加樣體積、加樣精度、孵育時間、孵育次數(shù)等)產(chǎn)生的隨機(jī)誤差。


高通量

可進(jìn)行多達(dá)6塊膜/膠的同時操作,每個槽位可獨立運(yùn)行,可同時比較6個不同實驗條件的結(jié)果,如:不同類型的封閉液、抗體濃度、孵育時間、洗滌次數(shù)等,大大提高工作效率。也可以同時滿足多個實驗者同時使用。

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更靈活

可適配4種不同規(guī)格的孵育盒,A. 150×88mm、B. 88×88mm、C. (58×88mm、28.5×88mm),兼容不同尺寸的膜/膠。標(biāo)配即送多達(dá)14個孵育盒(A型2個、B型6個、C型6個)


更智能

全觸控屏操作,可預(yù)設(shè)多個實驗方案,并且每個步驟的加樣體積、孵育時間、清洗次數(shù)、振蕩時間、振蕩幅度均可自主設(shè)置。

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3.成像


GelView 6000Plus智能圖像工作站

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600萬像素冷CCD,環(huán)境溫度以下55℃透射藍(lán)光模塊(470nm,18×15cm)*

五色LED熒光光源(藍(lán)475nm,綠530nm,紅620nm,近紅外685nm,近紅外760nm)*

六孔全自動濾光輪,標(biāo)配5種濾光片(535nm,600nm,700nm,750nm,830nm)*

分析軟件功能強(qiáng)大,可實現(xiàn)蛋白質(zhì)定量功能雙側(cè)落射白光


注:*為全配版配置,簡配版可選加裝該模塊。


模塊化設(shè)計:


化學(xué)發(fā)光

雙層可調(diào)節(jié)式載物臺,自由切換視野大小(12×10cm,17×14cm)


化學(xué)發(fā)光+透射藍(lán)光

透射藍(lán)光(470nm),成像面積18×15cm,6位濾光片輪(含600nm濾光片),藍(lán)光防護(hù)板


化學(xué)發(fā)光+透射藍(lán)光+多色熒光

5色LED熒光光源,475nm、 530nm、 620nm、685nm、760nm,6位濾光片輪(含535nm、600nm、 700nm、750nm、830nm濾光片 )


蛋白印跡實驗整體解決方案:全自動蛋白凝膠預(yù)制、智能操作、無需值守、一鍵曝光、自動灰度分析,8小時左右可完成。


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