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Western Blot蛋白印跡實驗整體解決方案
時間:2021-02-20 15:21:53點擊量:4175次
為什么要做Western Blot?


蛋白印跡實驗(Western Blot)概念
印跡法(blotting)是指將樣品轉移到固相載體上,而后利用相應的探測反應來檢測樣品的一種方法。

1975年,Southern建立了將DNA轉移到硝酸纖維素膜(NC膜)上,并利用DNA- RNA雜交檢測特定的DNA片段的方法,稱為Southern印跡法。

而后人們用類似的方法,對RNA和蛋白質進行印跡分析,對RNA的印跡分析稱為Northern印跡法,對單向電泳后的蛋白質分子的印跡分析稱為Western印跡法,對雙向電泳后蛋白質分子的印跡分析稱為Eastern印跡法。



實驗原理

利用SDS-PAGE對蛋白質樣品進行分離,然后轉移到固相載體(例如PVDF膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。利用蛋白溶液(如5%的BSA或脫脂奶粉溶液)封閉PVDF上剩余的疏水性結合位點,用所要研究的蛋白質的抗體孵育結合目的蛋白,再用適當標記的二抗孵育結合一抗,輔以適當的底物溶液處理PVDF膜,就會產生可見的區帶。

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Western-blot流程


樣本準備→蛋白定量→電泳分離→轉膜→封閉→抗體孵育→檢測


1.制膠

常規制膠步驟耗時、耗力、繁瑣、費用高、容易漏膠、存在安全隱患等


PAG-100Auto 全自動蛋白凝膠預制系統

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制膠數目:5塊/10塊,每次最多可同時配制10塊蛋白凝膠

凝膠尺寸:1.0mm Mini-gel(88×68×1mm)

分離范圍:10-200kD

觸摸屏尺寸:5英寸電容觸摸屏,分辨率:800×480

進樣器:雙進樣器,加樣精度>95%

混勻器:雙磁力攪拌器,混合更均勻

設備清洗:全自動液路清洗系統,試劑避免堵塞管路


PAG-100Auto 全自動蛋白凝膠預制系統

灌制分離膠 → 灌制濃縮膠 →插入梳子

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PAG-100Auto優勢


節約時間試劑更少,配比簡單,分離膠和濃縮膠可同時配制。最快只需 5 分鐘完成制膠,15 分鐘即可上樣電泳,而電泳時間也僅需30-40 分鐘。

更好的重復性PAG-100Auto 配備兩個磁力攪拌器和兩路自動進樣器,分別進行分離膠和濃縮膠的灌入,加樣精度和重復性高,避免手動加樣誤差。

更好的兼容性獨有的凝膠緩沖體系使凝膠具有更好的交聯率和更均勻的孔徑,可完美分離10-200 kDa 蛋白,無需根據分子量大小計算配比,一次配制,基本可滿足整個實驗室的使用。

高通量

一次可配制 5 塊或 10 塊凝膠,根據需求選擇不同包裝的試劑,全部加入即可。多余的凝膠可 4℃ 存放 30 天,隨時取用。

更安全

試劑采用低丙烯酰胺系統,配合獨有的 APS 引發體系,不但能保證快速有效的成膠,同時極大的預防了有害成份對實驗者健康的損害。

性價比更高

相比于預制膠的昂貴,手工制膠的繁瑣與耗時;PAG-100Auto 搭配PAG-100Kit制膠試劑盒,批量化制膠(可作為預制膠長時間保存),速度更快,操作更便捷,更具性價比。


2.發光之前的準備

WB-600Auto全自動蛋白印跡處理系統

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WB-600Auto 全自動蛋白印跡處理系統,通過儀器代替繁瑣、機械、重復、枯燥的人工實驗。高效、快速、自動化地完成 WB 實驗中對蛋白膜的封閉、洗膜、孵育等過程。您只需將轉印蛋白后的膜放到系統中,準備相應的試劑,并設定程序,剩下的工作將由WB-600Auto 自動完成。多達30 個可獨立運行的液體泵,可同時進行最多 6 塊膜的處理,每個通道可放置不同規格的樣品槽位,且可獨立設置程序運行,互不干擾,真正實現高通量。

節約時間

拋開繁瑣機械的封閉洗膜孵育過程,原本需要 4個小時 的實驗,現在只需5分鐘 準備試劑并設置程序,剩下所有的工作將由儀器自動完成。

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節約成本

完全兼容常規試劑,無專用試劑。可設置一抗,甚至封閉液等昂貴試劑的自動回收,且試劑存儲位置可實現冷藏,實現重復利用,節約試劑成本。


重復性更好

標準化的操作流程,可大大減少人工操作(如:加樣體積、加樣精度、孵育時間、孵育次數等)產生的隨機誤差。


高通量

可進行多達6塊膜/膠的同時操作,每個槽位可獨立運行,可同時比較6個不同實驗條件的結果,如:不同類型的封閉液、抗體濃度、孵育時間、洗滌次數等,大大提高工作效率。也可以同時滿足多個實驗者同時使用。

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更靈活

可適配4種不同規格的孵育盒,A. 150×88mm、B. 88×88mm、C. (58×88mm、28.5×88mm),兼容不同尺寸的膜/膠。標配即送多達14個孵育盒(A型2個、B型6個、C型6個)


更智能

全觸控屏操作,可預設多個實驗方案,并且每個步驟的加樣體積、孵育時間、清洗次數、振蕩時間、振蕩幅度均可自主設置。

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3.成像


GelView 6000Plus智能圖像工作站

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600萬像素冷CCD,環境溫度以下55℃透射藍光模塊(470nm,18×15cm)*

五色LED熒光光源(藍475nm,綠530nm,紅620nm,近紅外685nm,近紅外760nm)*

六孔全自動濾光輪,標配5種濾光片(535nm,600nm,700nm,750nm,830nm)*

分析軟件功能強大,可實現蛋白質定量功能雙側落射白光


注:*為全配版配置,簡配版可選加裝該模塊。


模塊化設計:


化學發光

雙層可調節式載物臺,自由切換視野大小(12×10cm,17×14cm)


化學發光+透射藍光

透射藍光(470nm),成像面積18×15cm,6位濾光片輪(含600nm濾光片),藍光防護板


化學發光+透射藍光+多色熒光

5色LED熒光光源,475nm、 530nm、 620nm、685nm、760nm,6位濾光片輪(含535nm、600nm、 700nm、750nm、830nm濾光片 )


蛋白印跡實驗整體解決方案:全自動蛋白凝膠預制、智能操作、無需值守、一鍵曝光、自動灰度分析,8小時左右可完成。


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